實驗流程
糖生物學是研究糖類的結構、功能及生物學特性的一門科學,糖類也可稱為多糖/聚糖,在自然界中廣泛分佈。在生物學中糖生物學雖然是一門較小的領域,但是發展迅速,與生物醫學、生物技術和基礎研究都密切相關。蛋白質組學是對生物系統中蛋白質的系統研究,它拓展瞭我們對蛋白質表達、修飾、相互作用和功能的認知。但在真核細胞中,大多數蛋白質都經過瞭翻譯後修飾(1)。常見的翻譯後修飾(依賴於多糖)對細胞存活至關重要,見圖 1。糖基化決定瞭糖復合物的粘附特性,細胞與細胞和細胞
與病原體的接觸主要是通過糖與蛋白相互作用完成的,這體現瞭糖生物學重要性。糖組學是研究多糖在生物系統中表達的一門學科,通過有效的酶學和分析技術將多糖結構與功能關聯起來。
N-連接的糖基化存在於蛋白質的天冬酰胺殘基上,O-連接的糖基化存在於絲氨酸或蘇氨酸上
去糖基化酶
自然界存在多種聚糖,包括:N-連接糖、O-連接糖、糖脂、O-乙酰葡糖胺和糖胺聚糖。N 糖基化是多糖通過蛋白質上的天冬酰胺連接,O-糖基化是多糖通過蛋白質上的絲氨酸或蘇氨酸連接。去糖基化是將多糖從糖蛋白中去除的過程,這個過程通常是為瞭方便研究糖蛋白中的多肽部分或多糖部分。對多糖結構的詳細瞭解有助於與其功能關聯起來。隻有高靈敏的分析工具才能有助於這項研究。化學法和酶促法都可以從糖蛋白中去除寡糖。但化學方法,例如用弱堿(2)進行 β 消除或溫和的肼解(3)較為劇烈,會導致蛋白質降解。而酶促法則更為溫和,可以完全去除糖分而不會降解蛋白質。
NEB 為糖生物學研究提供一系列糖苷內切酶和糖苷外切酶,其中許多酶都是重組酶。所有產品均經過多項嚴格質控檢測,確保產品純度最高、批間差最小以及單位價格最低。所有糖苷酶產品均經過污染檢測,由於某些糖苷外切酶不能水解 p-硝基苯-糖苷,因此我們使用熒光標記的寡糖檢測有無糖苷酶污染。登陸 http://www.NEBglycosidase.com,獲取 NEB 酶和試劑的最新清單。
參考文獻
- Spiro, R.G. (2002) Glycobiology 12, 43R–56R.
- Kakehi, K. et al. (1994) J. Chromatogr. A. 680, 209–215.
- Royle, L. et al. (2002) Anal. Biochem. 304, 70–90.