您的位置 首页 kreess

艾滋檢測試紙介紹及其包埋線、過時假陽、C線質控的原理等問題

一、HIV試紙:免疫膠體金技術。根據雙抗體夾心法、雙抗原夾心法和競爭抑制法免疫反應原理設計,以膠體金(乳膠/膠體硒/其他)顆粒作為指示標志,標記在抗原或抗體上,抗原抗體發生

一、HIV試紙:

免疫膠體金技術。

根據雙抗體夾心法、雙抗原夾心法和競爭抑制法免疫反應原理設計,以膠體金(乳膠/膠體硒/其他)顆粒作為指示標志,標記在抗原或抗體上,抗原抗體發生免疫反應後顯色,根據顯色深淺定性檢測病人標本中的抗體或抗原。

以此技術做的試紙在很多領域提供檢測,常見的就是醫療、工業。

而大傢常見的試紙產品有艾滋試紙、排卵試紙和早早孕(查懷孕的),大傢不常見而使用很多的還有乙肝檢測,丙肝檢測,戊肝檢測,甲肝檢測,毒品檢測,流感檢測,幽門螺桿菌檢測,腺病毒檢測,輪狀病毒檢測,肺炎支原體IgG/IgM抗體檢測,梅毒檢測,結核抗體檢測,便隱血檢測,風疹病毒檢測,弓形蟲檢測,心臟標記物檢測等等。

某品牌的產品目錄

該技術之所以被應用在眾多領域,

因該技術與以往常規診斷方法相比具有以下突出優點: ⭐️快速:全部檢測過程僅需 3-20分鐘。⭐️簡便:不需其它任何儀器設備,操作也極其簡單,可隨時隨地進行。⭐️可單份檢測:對標本既能成批檢測,又可單份檢測,患者可立刻拿到結果,不必等待。⭐️穩定性好:金標試劑穩定,可長期保存。⭐️檢測標本種類多:既可用於查血,又可用於檢尿或唾液,因而適合各種人群的檢查。

艾滋試紙抗體抗原檢測的核心原理是:抗體抗原特異性結合

膠體金技術隻是一種標記技術,如化學發光法,酶免法等,核心原理也是抗體抗原特異性結合,化學發光和酶都是標記技術。今天重點講膠體金技術試紙。

標記技術可以通俗的理解為,通過標記技術我們把肉眼不可見的反應結果或物質濃度通過信號轉換或放大,以達到肉眼可識別,或者機器可識別。

二、試紙結構

第三代艾滋試紙檢測原理(雙抗原夾心法)

人類免疫缺陷病毒(HIV 1/2)抗體檢測試劑盒(乳膠法)采用高度特異性的抗體抗原反應及免疫層析分析技術來定性檢測標本中是否含有 HIV-1 或者 2 型抗體。

試劑結構如上圖,

1,標記墊上標記瞭重組抗原1抗(此抗原被標記瞭膠體金,我們一般叫標記抗原)

2,檢測區(T)標記瞭重組抗原2抗(我們一般叫捕獲抗原或者固定抗原)

註:抗原是經過基因工程處理艾滋病毒片段,不具傳染性性

3,質控區(C)一般標記瞭羊抗人IgG抗體

三、檢測原理

檢測時,將樣本滴入試劑的加樣孔中,

1、如果樣本中有HIV-1, 2 型抗體,則會與預包被在標記墊上的重組抗原-膠體金顆粒標記結合物(1抗)反應結合,

然後,混合物在毛細效應下向上層析,在檢測區(T)與固定在膜上的重組 HIV 1 型和 HIV 2 型抗原(2抗)反應結合。大量結合物在此聚集,則在檢測區內(T)會出現紅色條帶,檢測區內出現紅色線條表明是陽性結果。

多餘的重組抗原-膠體金顆粒標記結合物(1抗)繼續往右,包備在C區的羊抗人抗體結合,大量聚集,顯色,表示試紙質量可控。

2、如果樣本裡沒艾滋抗體,標記墊上的重組抗原-膠體金顆粒標記結合物則沒有抗體結合,其在毛細效應下向上層析,因為沒有抗體結合,在檢測區(T)不能與固定在膜上的重組 HIV 1 型和 HIV 2 型抗原(2抗)反應結合。在檢測區內(T)沒有出現紅色條帶,表明是陰性結果。

然後重組抗原-膠體金顆粒標記結合物(1抗)繼續往右,包備在C區的羊抗人抗體結合,大量聚集,顯色,表示試紙質量可控。

四、C線質控原理

有朋友在問,無論加水,加尿,加血,C線都會出來,它到底質控的什麼?有沒有用?

看瞭前面的反應原理可能有些同學已經明白瞭。

那就是無論 HIV 抗體是否存在於樣本中,混合物都會繼續向上層析至質控區(C),出現一條紅色條帶。質控區內(C)所顯現的紅色條帶是判讀層析過程是否正常的標準,C線的出現,說明瞭標記墊上的1抗原有到達C區,如果都到瞭C區,那肯定就到瞭T區。所以C線也作為檢測試劑的內控標準。

五、包埋線,過時反應區顯色花瞭?

五、包埋線,時間久瞭反應區顯色或花瞭?

在上圖中,從左往右分別是10min、20min、30min、40min、50min

大傢應該能看到10min時,試紙板很清晰的陰性,但是到瞭50min時T區隱約就有一個杠,這誰遇到都嚇掉半條命。

這個現象是怎麼產生的呢?

  1. 因為層析在有效時間內是從樣品墊端向NC膜單向流動,超過判斷時間,由於NC膜面的持續蒸發,會導致層析方向由吸水濾紙端往NC膜方向逆流,有色標記物持續釋放,C區是抗體+抗原+膠體金的結合物,因為有抗體在T區會聚集。引起假陽性。這也解釋瞭為什麼超過規定時間判讀時會影響結果的判讀,導致結果不可靠。這個是比較重要的原因。
  2. 理論上血液不會和TC線結合(特別是T線,因為你關註它),但是由於T線的成分(密度,結構)與反應區其他地方不同,血液經過的時候容易沉積在這裡,顏色變深顯得像一條線。(這個時候你重新滴點緩沖液,這條線就不見瞭,原理有點類似你穿黑衣服流汗,幹瞭衣服就會有白色汗漬,清水打濕就不見瞭)
  3. T線被空氣氧化瞭,顏色變深。(口腔試紙特靈敏,也更容易發生反應)

總之,用試紙檢測之前詳細看完說明書,記住操作,重點關註兩點,加樣量是幾滴,反應時間是多少,到瞭規定時間,看結果,是陰性你就把它丟瞭,丟的遠遠的,再也撿不回來的地方。別留著一個小時,一個晚上再看,自己嚇自己。

六、艾滋試劑分代原則

自1985年雅培科學傢開發的第一個艾滋病毒檢測試劑盒,雅培HTLV-III [1]開始,30多年的技術更新,檢測技術也越來越先進。

第一代

病毒裂解物和純化的病毒抗原

第二代

重組抗原和合成肽

使用純化抗原,特異性有很大提高,隻檢測IgG抗體

第三代

雙抗原夾心法

進一步提高瞭敏感性,能檢測到IgG和IgM(增加瞭)

第四代

在三代的基礎上加入瞭p24抗原的檢測,抗原抗體聯合檢測,進一步縮短瞭窗口期。

最後,幾個同學們常問的問題,希望能有所幫助,,關於艾滋試紙分享到這裡,還有其他興趣瞭解可以在評論區探討。

发表回复

您的电子邮箱地址不会被公开。 必填项已用 * 标注

返回顶部